Родители Мистер, Конни и Дуг входили в группу которая занималась контрабандой марихуаны из Ямайки в США. Они оба были арестованы за участие в контрабандной деятельности. До начала суда они были освобождены под залог, в это время мать Лейтон забеременела. Позже она была осуждены на десять лет в тюрьме штата Техас, где она провела бо́льшую часть беременности. Лейтон родилась в больнице Техаса, куда её мать была доставлена во время схваток. Через три месяца после родов мать вернулась в тюрьму, чтобы продолжить отбывать свой срок.Пробыв в тюрьме шестнадцать месяцев, она была досрочно освобождена и стала жить вместе с дочерью.Когда Лейтон было 11, она переехала со своей тетей в Нью-Йорк, и начала работать в качестве модели в "Wilhelmina", затем она работала с фотографом Софией Коппола.

Дебют Мистер на телевидение произошёл в 1999 году когда она сыграла Алиссу Тернер в сериале «Закон и Порядок». После этого были эпизодические роли в сериалах «Седьмое небо», «C.S.I.: Место преступления Майами», «24 часа», «8 простых правил для друга моей дочери-подростка» и других. В большом кино дебют Лейтон Мистер состоялся в 2003 году в фильме «Проклятие самоубийцы». С 2007 года Лейтон участвует в популярном сериале «Сплетница», где играет роль Блэр Уолдорф. Сериал рассказывает о жизни студентов с Верхнего Ист-Сайда.

Лейтон живет в Нью-Йорке, в районе Вест Вилледж. У нее роман с молодым актером Себастианом Стэном, который снимался вместе с ней в сериале «Сплетница». В интервью журналу Teen Vogue Мистер рассказала о своем прошлом: «Я родилась не в тюрьме, я родилась в больнице. Я жила со своей матерью в течение нескольких месяцев, после чего я жила со своей бабушкой, пока моя мама не вышла. Но у меня была нормальная жизнь.». Мистер заняла 12 место в списке "2009 Hot 100" журнала Maxim. Кроме съемок в кино, Лейтон записывает свой дебютный альбом в стиле электро-поп, выход которого планируется в 2009 году.

2003 — Hangman's Curse — Элиша Спрингфилд
2004 — Hollywood Division — Мишель
2006 — Flourish — Луси Ковнер
2006 — Inside — Джози
2007 — Drive-Thru — Макензи Карпентер
2007 — Remember the Daze — Тори
2007 — The Haunting of Sorority Row — Саманта Уиллоус
2008 — Killer Movie — Джени Ханзен

1999 — Law & Order — Алисса Тёрнер
2001 — Boston Public — Сара Брин
2002 — Family Affair — Ирен
2003 — Tarzan — Ники Портер
2004 — Crossing Jordan — Мэри Странд
2004 — 7th Heaven — Кендолл
2004 — North Shore — Вероника Фаррелл
2004 — Entourage — Джастайн Чапин
2005 — 24 — Дебби Пендлетон
2005 — 8 Simple Rules — Никки
2005 — Вероника Марс — Кэрри Бишоп
2005 — Numb3rs — Карен Камден
2005–2006 — Surface — Савана Беннетт
2006 — Secrets of a Small Town — Кайла Родес
2006 — Доктор Хаус — Али
2007 — C.S.I.: Место преступления Майами — Хизер Кроули
2007 — Shark — Меган
2007–н.в. — Сплетница — Блэр Уолдорф (en)